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簡(jiǎn)要描述:酶聯(lián)免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一。酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法,簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法,或者ELISA法。它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合,然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。
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實(shí)驗(yàn)原理:
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體
②酶標(biāo)記的抗原或抗體
③酶作用的底物(顯色劑)。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
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